地稔为野牡丹科植物地稔Melastoma dodecandrum Lour. 的干燥全草，又名土茄子、山辣茄、地脚稔、地枇杷等[1]。关于地稔的最早记载见于《岭南采药录》中，是畲族、瑶族、苗族等一些少数民族的常用药材[2]，主要分布在广西、广东、贵州、湖南、浙江、福建等地区[3]。地稔归心、肝、脾、肺经，性凉，味甘、涩，主要功效为活血止血、祛风利湿、消肿祛瘀、清热解毒。地稔全株供药用，其果实可以食用，还可以用来酿酒，临床主治发热、水肿、疼痛、痢疾、痈疮、黄疸、崩漏等病症[4]。地稔的药材资源丰富，使用范围广泛，临床疗效显著，具有广阔的开发利用前景。
地稔具有多种化学成分，其主要有效成分之一为黄酮类化合物。目前对地稔的研究主要集中在化学成分、药理作用、营养保健等方面，且对其中的黄酮类化合物仅有部分化学成分及药理作用的报道，其综合开发利用还处于空白阶段。因此，本文以地稔的总黄酮作为提取物，研究其纯化工艺，可为中药制剂、保健食品和化工产品的原料开发提供参考依据，也为该药材进入国际国内市场奠定坚实的基础。
1 试药与仪器
1.1 试药
药材产于贵州省龙里县羊场镇，经鉴定为地稔Melastoma dodecandrum Lour. 的干燥全草；聚酰胺（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）、D101型、AB-8 型、X-5 型、CAD-40 型、AP-20 型大孔吸附树脂（天津市光复精细化工研究所）；芦丁对照品（贵州迪大生物科技有限责任公司，批号：GZDD-0001，＞98%）；其它试剂均为分析纯。
1.2 仪器
紫外-可见分光光度计（上海元析仪器有限公司，UV-5900型）；分析天平（奥豪斯仪器有限公司，EX2250ZH型）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂，RE-52AA型）；数显恒温水浴锅（常州朗越仪器制造有限公司，SYG-2型）；电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司，101-1AB型）。
2 方法与结果
2.1 地稔总黄酮的含量测定[5]
称取于105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品适量，加入60%乙醇溶解并定容，配制得浓度为0.5000 mg/mL的对照品溶液。
分别精密移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL对照品溶液，置于25 mL容量瓶中，依次加入6% NaNO2溶液0.6 mL、8% Al(NO3)3
溶液1.0 mL、2% NaOH溶液4.0 mL，加水定容显色15 min，于500 nm波长处测定吸光度。以浓度(C)为横坐标、吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线，计算得标准方程为A=11.614C+0.0266，相关系数R2 = 0.9998。表明芦丁对照品的浓度(C)在0.01~0.07 mg/mL范围内，与吸光度(A)呈良好的线性关系。
2.2 上样液的制备
称取地稔粉末5 g，置圆底烧瓶中，加60% 乙醇500mL，加热回流1 h，抽滤，回收乙醇，浓缩至体积为20 mL，即得总黄酮质量浓度约为9 mg/mL 的样品溶液。
2.3 树脂型号的确定
2.3.1 静态吸附试验
分别称取预处理好的各型号树脂10 g，置100 mL锥形瓶中，加入质量浓度为1.60 mg/mL的地稔总黄酮浓缩液50 mL，密塞，于室温条件下静置吸附24 h，过滤，测定滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），计算各型号树脂的吸附量（mg/g）及吸附率（%），结果见表1。
2.3.2 静态解吸试验
分别将2.3.1试验中吸附饱和的各型号大孔吸附树脂加入95% 乙醇50 mL，密塞，于室温条件下静置解吸24 h，过滤，测定滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），计算各型号树脂的解吸率（%），结果见表1。
表1 各型号树脂的吸附及解吸情况
树脂型号
吸附量(mg/g)
吸附率(%)
解吸率(%)
AB-8
6.18
77.31
59.82
D101
7.10
88.81
65.17
CAD-40
6.23
77.88
59.95
AP-20
6.80
85.06
60.84
X-5
6.30
78.69
56.63
聚酰胺
6.70
83.69
29.35
吸附量=
，吸附率= 
，解吸率= 
；
为上样液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），
为吸附后滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），为解吸后滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），V为上样液的体积（mL），M为大孔吸附树脂的质量（g）。
由表1可知：各型号大孔吸附树脂对地稔总黄酮均有一定的吸附性，其中以D101型大孔吸附树脂的吸附量及吸附率最佳。此外，D101型大孔吸附树脂的解吸率也明显优于其他5 种型号。因此，选取D101型大孔吸附树脂作为研究地稔总黄酮纯化工艺的树脂。
2.4 地稔总黄酮的纯化工艺考察
2.4.1 上样液pH值的考察
以上样液的pH值为基准，分别用1 mol/L的HCl溶液或1 mol/L的NaOH溶液调节上样液pH值，使其分别为1.75、3.71（原液）、5.51、7.49、9.74。用不同pH值的溶液分别上样，收集经树脂吸附后的溶液，计算吸附率（%），结果见图1。
图1
各pH值上样液对吸附率的影响
由图可知，随着上样液pH 值的增加，吸附率总体呈先增大后减小的趋势。当上样液的pH 值为3.71时，吸附率最大为57.31 %。而后随着上样液 pH值的增大，吸附率明显降低。因此，选取 3.71为最佳上样液 pH值，即用原溶液上样。
2.4.2 上样液质量浓度的考察
取6份质量浓度为9.15 mg/mL的上样液各20 mL，除第1份外，其余分别用蒸馏水稀释至40、60、80、100、120 mL。使6份上样液中总黄酮的质量浓度分别为9.15、4.58、3.05、2.29、1.83、1.53 mg/mL，分别上样，收集吸附后的溶液，计算吸附率（%），结果见图2。
图2.2 各浓度上样液对吸附率的影响
由图可知，随着上样液质量浓度的增加，吸附率总体呈先增大后减小的趋势。当上样液质量浓度为3.05 mg/mL时，吸附率最大为75.89%，而后吸附率大幅降低。因此，选取3.05 mg/mL为最佳上样液质量浓度。
2.4.3 树脂床径高比
取预处理好的D101型大孔吸附树脂，装柱，使径高比分别为1：4、1：5、1：6、1：7、1：8，备用。分别取5份已确定最佳质量浓度的上样液上样，收集吸附后的溶液，计算吸附率（%），结果见图3。
图3
各树脂床径高比对吸附率的影响
由图可知，随着树脂床径高比的增大，吸附率总体呈先增大后减小的趋势。当树脂床径高比为1：6时，吸附率最大为75.79%。因此，选取1 ：6为树脂床径高比。
2.4.4 上样液体积的考察
取预处理好的D101型大孔吸附树脂，按最佳树脂床径高比装柱，备用。取上样液上样，收集吸附后的溶液，每10 mL接取1管。测定每管收集液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），绘制上样吸附泄露曲线，结果见图2。
图4 大孔吸附树脂上样吸附泄漏曲线
由图4可知，最初由于大孔吸附树脂吸附不完全，吸附后溶液中的总黄酮质量浓度偏高；随后当上样量处于60~120 mL范围内时，吸附后溶液中的总黄酮质量浓度趋于稳定。当上样量超过120 mL时，流出液中的总黄酮质量浓度开始上升，此时D101型大孔吸附树脂对总黄酮的吸附能力已达最大值。而后大孔吸附树脂吸附能力下降，上样液中的总黄酮开始泄漏。为保证树脂吸附能力及纯化效果，故选取120 ml为最佳上样量。
2.4.5 洗脱剂体积分数的考察
分别取5份上样液各120 mL上样，待其吸附完全，用蒸馏水洗脱至流出液呈无色，再
分别用体积分数为30%、45%、60%、75%、95% 的乙醇各100 mL洗脱，收集解吸后溶液，计算解吸率（%）。再分别取各溶液10 mL于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置105 ℃烘箱中干燥3 h，测定浸膏重量（g），计算总黄酮的纯度（%），结果如下。
表2 各体积分数洗脱剂的解吸率及总黄酮纯度
洗脱剂体积分数(%)
30
45
60
75
95
解吸率(%)
53.41
62.15
70.11
71.52
72.89
浸膏重量(g)
0.0379
0.0349
0.0334
0.0334
0.0334
总黄酮纯度(%)
32.09
40.54
47.83
48.76
51.62
由表2可知，随着洗脱剂体积分数的增加，解吸率及解吸后溶液中的总黄酮纯度逐渐增大。洗脱剂体积分数过小时，只有少部分总黄酮被解吸出来，且解吸后溶液中的总黄酮纯度较低。当洗脱剂体积分数为95%时，解吸率及解吸后溶液中的总黄酮纯度最大。因此，选取95% 为最佳洗脱剂体积分数。
2.4.6 洗脱剂体积的考察
取上样液120 mL，上样，待其吸附完全，用蒸馏水洗脱至流出液呈无色，再用体积分数为95% 的乙醇洗脱，收集解吸后溶液，每10 mL接取1管。测定每管溶液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），绘制洗脱曲线，考察洗脱剂体积，结果见图5。
图5 不同洗脱剂体积的考察
由图5可知，不同体积洗脱剂的洗脱曲线峰型集中，在第2管，即加入20 mL洗脱剂后，洗脱出的总黄酮的量达到最高值；在加入100 mL洗脱剂后，总黄酮基本洗脱完全。因此，选取100 mL为洗脱剂的体积。
2.5 最佳纯化工艺验证
按照优选的地稔总黄酮最佳纯化工艺，对该工艺进行验证试验，试验结果如下：
表3
最佳纯化工艺验证
试验次数
总黄酮浓度(mg/mL)
浸膏重(g)
总黄酮纯度(%)
RSD(%)
1
1.695
0.0331
51.21
2
1.707
0.0340
50.21
0.998
3
1.659
0.0328
50.58
平均值
1.687
0.0333
50.67
地稔为野牡丹科植物地稔Melastoma dodecandrum Lour. 的干燥全草，又名土茄子、山辣茄、地脚稔、地枇杷等[1]。关于地稔的最早记载见于《岭南采药录》中，是畲族、瑶族、苗族等一些少数民族的常用药材[2]，主要分布在广西、广东、贵州、湖南、浙江、福建等地区[3]。地稔归心、肝、脾、肺经，性凉，味甘、涩，主要功效为活血止血、祛风利湿、消肿祛瘀、清热解毒。地稔全株供药用，其果实可以食用，还可以用来酿酒，临床主治发热、水肿、疼痛、痢疾、痈疮、黄疸、崩漏等病症[4]。地稔的药材资源丰富，使用范围广泛，临床疗效显著，具有广阔的开发利用前景。
地稔具有多种化学成分，其主要有效成分之一为黄酮类化合物。目前对地稔的研究主要集中在化学成分、药理作用、营养保健等方面，且对其中的黄酮类化合物仅有部分化学成分及药理作用的报道，其综合开发利用还处于空白阶段。因此，本文以地稔的总黄酮作为提取物，研究其纯化工艺，可为中药制剂、保健食品和化工产品的原料开发提供参考依据，也为该药材进入国际国内市场奠定坚实的基础。
1 试药与仪器
1.1 试药
药材产于贵州省龙里县羊场镇，经鉴定为地稔Melastoma dodecandrum Lour. 的干燥全草；聚酰胺（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）、D101型、AB-8 型、X-5 型、CAD-40 型、AP-20 型大孔吸附树脂（天津市光复精细化工研究所）；芦丁对照品（贵州迪大生物科技有限责任公司，批号：GZDD-0001，＞98%）；其它试剂均为分析纯。
1.2 仪器
紫外-可见分光光度计（上海元析仪器有限公司，UV-5900型）；分析天平（奥豪斯仪器有限公司，EX2250ZH型）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂，RE-52AA型）；数显恒温水浴锅（常州朗越仪器制造有限公司，SYG-2型）；电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司，101-1AB型）。
2 方法与结果
2.1 地稔总黄酮的含量测定[5]
称取于105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品适量，加入60%乙醇溶解并定容，配制得浓度为0.5000 mg/mL的对照品溶液。
分别精密移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL对照品溶液，置于25 mL容量瓶中，依次加入6% NaNO2溶液0.6 mL、8% Al(NO3)3
溶液1.0 mL、2% NaOH溶液4.0 mL，加水定容显色15 min，于500 nm波长处测定吸光度。以浓度(C)为横坐标、吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线，计算得标准方程为A=11.614C+0.0266，相关系数R2 = 0.9998。表明芦丁对照品的浓度(C)在0.01~0.07 mg/mL范围内，与吸光度(A)呈良好的线性关系。
2.2 上样液的制备
称取地稔粉末5 g，置圆底烧瓶中，加60% 乙醇500mL，加热回流1 h，抽滤，回收乙醇，浓缩至体积为20 mL，即得总黄酮质量浓度约为9 mg/mL 的样品溶液。
2.3 树脂型号的确定
2.3.1 静态吸附试验
分别称取预处理好的各型号树脂10 g，置100 mL锥形瓶中，加入质量浓度为1.60 mg/mL的地稔总黄酮浓缩液50 mL，密塞，于室温条件下静置吸附24 h，过滤，测定滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），计算各型号树脂的吸附量（mg/g）及吸附率（%），结果见表1。
2.3.2 静态解吸试验
分别将2.3.1试验中吸附饱和的各型号大孔吸附树脂加入95% 乙醇50 mL，密塞，于室温条件下静置解吸24 h，过滤，测定滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），计算各型号树脂的解吸率（%），结果见表1。
表1 各型号树脂的吸附及解吸情况
|
树脂型号 |
吸附量(mg/g) |
吸附率(%) |
解吸率(%) |
|
AB-8 |
6.18 |
77.31 |
59.82 |
|
D101 |
7.10 |
88.81 |
65.17 |
|
CAD-40 |
6.23 |
77.88 |
59.95 |
|
AP-20 |
6.80 |
85.06 |
60.84 |
|
X-5 |
6.30 |
78.69 |
56.63 |
|
聚酰胺 |
6.70 |
83.69 |
29.35 |
吸附量=，吸附率= ，解吸率= ；为上样液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），为吸附后滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），为解吸后滤液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），V为上样液的体积（mL），M为大孔吸附树脂的质量（g）。
由表1可知：各型号大孔吸附树脂对地稔总黄酮均有一定的吸附性，其中以D101型大孔吸附树脂的吸附量及吸附率最佳。此外，D101型大孔吸附树脂的解吸率也明显优于其他5 种型号。因此，选取D101型大孔吸附树脂作为研究地稔总黄酮纯化工艺的树脂。
2.4 地稔总黄酮的纯化工艺考察
2.4.1 上样液pH值的考察
以上样液的pH值为基准，分别用1 mol/L的HCl溶液或1 mol/L的NaOH溶液调节上样液pH值，使其分别为1.75、3.71（原液）、5.51、7.49、9.74。用不同pH值的溶液分别上样，收集经树脂吸附后的溶液，计算吸附率（%），结果见图1。
图1
各pH值上样液对吸附率的影响
由图可知，随着上样液pH 值的增加，吸附率总体呈先增大后减小的趋势。当上样液的pH 值为3.71时，吸附率最大为57.31 %。而后随着上样液 pH值的增大，吸附率明显降低。因此，选取 3.71为最佳上样液 pH值，即用原溶液上样。
2.4.2 上样液质量浓度的考察
取6份质量浓度为9.15 mg/mL的上样液各20 mL，除第1份外，其余分别用蒸馏水稀释至40、60、80、100、120 mL。使6份上样液中总黄酮的质量浓度分别为9.15、4.58、3.05、2.29、1.83、1.53 mg/mL，分别上样，收集吸附后的溶液，计算吸附率（%），结果见图2。
图2.2 各浓度上样液对吸附率的影响
由图可知，随着上样液质量浓度的增加，吸附率总体呈先增大后减小的趋势。当上样液质量浓度为3.05 mg/mL时，吸附率最大为75.89%，而后吸附率大幅降低。因此，选取3.05 mg/mL为最佳上样液质量浓度。
2.4.3 树脂床径高比
取预处理好的D101型大孔吸附树脂，装柱，使径高比分别为1：4、1：5、1：6、1：7、1：8，备用。分别取5份已确定最佳质量浓度的上样液上样，收集吸附后的溶液，计算吸附率（%），结果见图3。
图3
各树脂床径高比对吸附率的影响
由图可知，随着树脂床径高比的增大，吸附率总体呈先增大后减小的趋势。当树脂床径高比为1：6时，吸附率最大为75.79%。因此，选取1 ：6为树脂床径高比。
2.4.4 上样液体积的考察
取预处理好的D101型大孔吸附树脂，按最佳树脂床径高比装柱，备用。取上样液上样，收集吸附后的溶液，每10 mL接取1管。测定每管收集液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），绘制上样吸附泄露曲线，结果见图2。
图4 大孔吸附树脂上样吸附泄漏曲线
由图4可知，最初由于大孔吸附树脂吸附不完全，吸附后溶液中的总黄酮质量浓度偏高；随后当上样量处于60~120 mL范围内时，吸附后溶液中的总黄酮质量浓度趋于稳定。当上样量超过120 mL时，流出液中的总黄酮质量浓度开始上升，此时D101型大孔吸附树脂对总黄酮的吸附能力已达最大值。而后大孔吸附树脂吸附能力下降，上样液中的总黄酮开始泄漏。为保证树脂吸附能力及纯化效果，故选取120 ml为最佳上样量。
2.4.5 洗脱剂体积分数的考察
分别取5份上样液各120 mL上样，待其吸附完全，用蒸馏水洗脱至流出液呈无色，再
分别用体积分数为30%、45%、60%、75%、95% 的乙醇各100 mL洗脱，收集解吸后溶液，计算解吸率（%）。再分别取各溶液10 mL于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置105 ℃烘箱中干燥3 h，测定浸膏重量（g），计算总黄酮的纯度（%），结果如下。
表2 各体积分数洗脱剂的解吸率及总黄酮纯度
|
洗脱剂体积分数(%) |
30 |
45 |
60 |
75 |
95 |
|
解吸率(%) |
53.41 |
62.15 |
70.11 |
71.52 |
72.89 |
|
浸膏重量(g) |
0.0379 |
0.0349 |
0.0334 |
0.0334 |
0.0334 |
|
总黄酮纯度(%) |
32.09 |
40.54 |
47.83 |
48.76 |
51.62 |
由表2可知，随着洗脱剂体积分数的增加，解吸率及解吸后溶液中的总黄酮纯度逐渐增大。洗脱剂体积分数过小时，只有少部分总黄酮被解吸出来，且解吸后溶液中的总黄酮纯度较低。当洗脱剂体积分数为95%时，解吸率及解吸后溶液中的总黄酮纯度最大。因此，选取95% 为最佳洗脱剂体积分数。
2.4.6 洗脱剂体积的考察
取上样液120 mL，上样，待其吸附完全，用蒸馏水洗脱至流出液呈无色，再用体积分数为95% 的乙醇洗脱，收集解吸后溶液，每10 mL接取1管。测定每管溶液中的总黄酮质量浓度（mg/mL），绘制洗脱曲线，考察洗脱剂体积，结果见图5。
图5 不同洗脱剂体积的考察
由图5可知，不同体积洗脱剂的洗脱曲线峰型集中，在第2管，即加入20 mL洗脱剂后，洗脱出的总黄酮的量达到最高值；在加入100 mL洗脱剂后，总黄酮基本洗脱完全。因此，选取100 mL为洗脱剂的体积。
2.5 最佳纯化工艺验证
按照优选的地稔总黄酮最佳纯化工艺，对该工艺进行验证试验，试验结果如下：
表3
最佳纯化工艺验证
|
试验次数 |
总黄酮浓度(mg/mL) |
浸膏重(g) |
总黄酮纯度(%) |
RSD(%) |
|
1 |
1.695 |
0.0331 |
51.21 |
|
|
2 |
1.707 |
0.0340 |
50.21 |
0.998 |
|
3 |
1.659 |
0.0328 |
50.58 |
|
|
平均值 |
1.687 |
0.0333 |
50.67 |
|
由表3可知，在最佳工艺条件下，纯化得到地稔总黄酮平均纯度达50% 以上，且该工艺稳定。
3 讨论
在研究地稔总黄酮的纯化工艺之前，课题组运用单因素试验法和正交试验法，优选出了地稔中总黄酮成分的最佳提取工艺，并初步建立了稳定可靠的含量测定方法，为地稔总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺研究奠定基础。
订阅方式：
①在线订阅（推荐）：www.sdchem.net.cn
②邮局订阅：邮发代号24-109
投稿方式：
①在线投稿（推荐）：www.sdchem.net.cn
作者只需要简单注册获得用户名和密码后，就可随时进行投稿、查稿，全程跟踪稿件的发表过程，使您的论文发表更加方便、快捷、透明、高效。
②邮箱投稿：sdhgtg@163.com sdhg@sdchem.net
若“在线投稿”不成功，可使用邮箱投稿，投稿邮件主题：第一作者名字/稿件题目。
投稿时请注意以下事项：
①文前应有中英文“题目”、“作者姓名”、“单位”、“邮编”、“摘要”、“关键词”；
②作者简介包括：姓名、出生年、性别、民族、籍贯或出生地、工作单位、职务或职称、学位、研究方向；
③论文末应附“参考文献”，执行国标GB/T7714-2005标准，“参考文献”序号应与论文中出现的顺序相符；
④注明作者的联系方式，包括电话、E-mail、详细的通讯地址、邮编，以便联系并邮寄杂志。
欢迎投稿 答复快捷 发表迅速