定向进化转录调节基因提高漆酶异源表达

　　

为提高Tremetes viscolor漆酶Lcc的表达量，本研究主要针对漆酶转录调节区域进行定向进化。利用易错PCR，选择不同浓度的Mn²⁺对调节区域进行突变，并以酿酒酵母为宿主细胞进行异源表达，构建S.c/pYES2-Lcc调节子突变库。选用2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)为底物的96孔板测定漆酶酶活高通量筛选方法对突变库中960株突变体进行筛选，并对酶活高的突变体进行摇瓶复筛，最终获得三株遗传稳定性良好的酶活较高地突变体M1、M2、M3，其粗酶液酶活分别是野生型菌株粗酶液酶活的1.73倍、1.46倍、1.37倍，突变菌株M1粗酶液酶活最高可达35.4 U/L。

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