摘要：目的 探究复方淫羊藿硒酵母冲剂的功能作用及其毒性。方法 实验参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）分别对小鼠负重游泳时间、小鼠运动后血清尿素含量和肝糖原含量进行测定。此外，实验为探究受试物的增强免疫力功能，还进行了抗体生成细胞测定、血清溶血素的测定、NK细胞活性测定实验。结果 连续给予小鼠灌胃不同剂量浓度的复方淫羊藿硒酵母冲剂30天，小鼠负重游泳时间与对照组比较明显延长，运动后小鼠的血清尿素氮含量与对照组比较明显降低，肝糖原含量与对照组比较明显升高。小鼠的体液免疫功能、NK细胞活性功能测定结果均为阳性。研究通过急性毒性实验及Ames实验证实，复方淫羊藿硒酵母冲剂无急性毒性和遗传毒性作用，具有安全性。结论 复方淫羊藿硒酵母冲剂具有一定的缓解体力疲劳和增强免疫力功能的作用，具有食用安全性。
关键词：复方淫羊藿硒酵母冲剂、缓解体力疲劳、增强免疫，安全性
中药淫羊藿服用历史悠久，不乏历代医学对其药用安全性的评价。我国古代医学巨著《神农本草经》将其列为中品，《本草纲目》载：“淫羊藿益精气、坚筋骨、补腰膝，强心力”。淫羊藿性辛、甘、温。归肝、肾经，具有多重功效。随着现代医学科技的进步，各种中药的应用范围的得到极大扩展，以淫羊藿为主要原料制成的各种复方层出不穷。本文就复方淫羊藿硒酵母冲剂的缓解体力疲劳功能和增强免疫力功能作用及其毒理学进行初步研究。
1 材料和方法
1.1 样品：复方淫羊藿硒酵母冲剂由2%淫羊藿提取物、2.5%富硒酵母（500ppm）、30%玛咖粉、60%破壁灵芝孢子粉、5.5%木糖醇组成，样品为棕褐色粉末，生产批号为20190325，由某公司提供。人体推荐量为每人每日6g/60kg.bw。
1.2 实验动物：选用山东大学实验动物中心提供的健康SPF昆明种雄性小鼠，体重18-22g。环境设置为温度22℃±2℃，相对湿度50%±10%。为保证实验结果的均衡，缓解体力疲劳功能实验前测定小鼠负重游泳时间、血尿素、肝糖原和血乳酸含量，并根据实验结果将小鼠随机分为4大组，每大组再设置对照组、低、中、高剂量组，每组10只小鼠。增强免疫力功能中实验动物分为2大组，一组用于血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定；另一组用于小鼠NK细胞活性测定。每免疫大组小鼠分为水对照组和低、中、高剂量组，各10只。
1.3 剂量设置与受试物给予方式：复方淫羊藿硒酵母冲剂，为棕色粉末，人体推荐日用量为6g/人/日，则相当于每人每日0.1g/kg.bw（体重按60kg计）。以人体推荐量的5倍、10倍、30倍确定小鼠的低、中、高剂量，即各组小鼠每日食用量分别为0.5g/kg.bw、1g/kg.bw、3g/kg.bw。经口每日一次灌胃给予小鼠受试物，灌胃体积按20mL/kg.bw，对照组以等体积的去离子水代替受试物溶液灌胃，连续给予30d后测缓解体力疲劳功能、增强免疫力功能的各项指标。
2实验方法：实验均参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）进行。
3实验数据统计：所有数据均经SPSS统计软件进行方差分析。
4实验结果：
4.1 复方淫羊藿硒酵母冲剂对负重小鼠游泳时间、尿素、肝糖原的影响
表1 复方淫羊藿硒酵母冲剂对小鼠负重游泳时间、尿素、肝糖原的影响（
±s）
组 别 | 动物数（只） | 游泳时间（min） | 尿素（mmol/L） | 肝糖原（mg/100g） |
对 照 组 | 10 | 23.01±10.32 | 8.33±1.31 | 1481.16±268.34 |
低剂量组 | 10 | 35.57±13.49* | 7.98±1.45 | 1742.23±377.59 |
中剂量组 | 10 | 36.72±14.06* | 6.97±0.93* | 1788.72±409.19 |
高剂量组 | 10 | 39.54±13.31** | 6.96±1.04* | 1962.12±386.01** |
与对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01，下同
由表1可见，经口给予小鼠不同剂量样品30d，低、中、高剂量组小鼠与对照组比较，负重游泳时间明显延长（P<0.05或P<0.01）。中、高剂量组小鼠与对照组比较，血清尿素含量均显著性降低（P<0.05）。与对照组比较，高剂量组小鼠肝糖原含量显著升高（P<0.01）。
4.2复方淫羊藿硒酵母冲剂对小鼠抗体生成细胞数的影响
表2 复方淫羊藿硒酵母冲剂对小鼠抗体生成细胞数和血清溶血素水平的影响（
±SD）
组别 | 动物数(只) | 溶血空斑数(×103/全脾) | 抗体积数 |
水对照组 | 10 | 91.50±38.72 | 116.20±22.52 |
低剂量组 | 10 | 95.55±57.34 | 114.20±63.70 |
中剂量组 | 10 | 108.30±36.17 | 159.10±47.35* |
高剂量组 | 10 | 117.08±48.07 | 164.80±44.48* |
由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的复方淫羊藿硒酵母冲剂30天，低、中、高剂量组与对照组比较，抗体生成细胞数差异均无显著性（P>0.05），即复方淫羊藿硒酵母冲剂对小鼠抗体生成细胞数无影响；低剂量组与对照组与比较，抗体积数无显著性（P>0.05），但中、高剂量组与对照组比较，差异有显著性（P<0.05），即复方淫羊藿硒酵母冲剂可提高小鼠血清溶血素水平。
4.3复方淫羊藿硒酵母冲剂对小鼠NK细胞活性的影响
表3 复方淫羊藿硒酵母冲剂对小鼠NK细胞活性的影响 | ||||
组别 | 动物数 (只) | NK细胞活性 ( % ) | NK细胞活性对数转换值 | P值 |
水对照组 | 10 | 34.73±10.06 | 0.627±0.11 |
|
低剂量组 | 10 | 37.61±15.96 | 0.655±0.17 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 48.61±14.39 | 0.771±0.15 | P<0.05 |
高剂量组 | 10 | 49.60±12.18 | 0.782±0.12 | P<0.05 |
由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的复方淫羊藿硒酵母冲剂30天，低剂量组与对照组比较，NK细胞活性无显著性（P>0.05），中、高剂量组与对照组比较，差异有显著性（P<0.05），即复方淫羊藿硒酵母冲剂可增强小鼠的NK细胞活性。
为保证复方淫羊藿硒酵母冲剂食用安全性，为后期临床应用和研究提供可靠数据，实验还对其毒性作用进行了探究。小鼠急性毒性试验采用最大耐受量（MTD）法进行。实验称取一定量的受试物，用蒸馏水溶解并定容至50mL，灌胃给予健康昆明种小鼠（雌雄各半）。小鼠空腹16h后，以0.20mL/10g.bw容量灌胃2次，间隔4h，总剂量为20.0g/kg.bw，连续观察并记录14天内动物的中毒表现及死亡情况。实验未见两种性别的小鼠有明显的中毒症状，也无死亡。将小鼠处死后进行解剖检查，肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺、胃、肠等主要器官，均未见明显异常改变。实验结果显示，复方淫羊藿硒酵母冲剂对两种性别小鼠的最大耐受剂量（MTD）均大于20.0g/kg。bw。Ames 试验采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌进行试验。采用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆作为体外代谢活化系统。试验设8、40、200、1000、5000μg/皿5个剂量，每个剂量做3个平行皿。同时设自发回变、溶剂对照和阳性对照。37℃培养48h，计数每皿回变菌落数。整套试验在相同条件下重复做两次。结果Ames试验为阴性。以上毒理学研究实验证实，复方淫羊藿硒酵母冲剂无急性毒性和遗传毒性作用，具有安全性。
4.4 小结
本实验表明，连续给予小鼠不同剂量浓度的复方淫羊藿硒酵母冲剂样品30天，小鼠负重游泳时间与对照组比较明显延长，运动后小鼠的血清尿素氮含量与对照组比较明显降低，肝糖原含量与对照组比较明显升高。小鼠的体液免疫功能、NK细胞活性功能测定结果均为阳性。结果表明，复方淫羊藿硒酵母冲剂具有一定的缓解体力疲劳和增强免疫力功能的作用。小鼠急性毒性实验和遗传毒性Ames实验证实，复方淫羊藿硒酵母冲剂具有食用安全性。
5讨论
本研究毒理学实验评价结果显示，复方淫羊藿硒酵母冲剂的MTD＞20g/kg·bw，根据毒性分级标准，为无毒物质。说明复方淫羊藿硒酵母冲剂对小鼠实际无毒，安全性高，可为临床合理用药及开展药效学研究提供理论依据。试验连续给予小鼠灌胃不同剂量的复方淫羊藿硒酵母冲剂30天，小鼠负重游泳时间与对照组比较明显延长，运动后小鼠的血清尿素氮含量与对照组比较明显降低，肝糖原含量与对照组比较明显升高。小鼠的体液免疫功能、NK细胞活性功能测定结果均为阳性。复方淫羊藿硒酵母冲剂由淫羊藿提取物、富硒酵母、玛咖粉、破壁灵芝孢子粉等组成，文献报道各原料均具有一定抗疲劳、增强免疫作用。查圣华等研究表明，玛咖和淫羊藿配伍具有协同作用，其中玛咖含有多种营养物质，如蛋白质、锌、牛磺酸等，对运动后代谢产品的清除和能量的储存具有重要作用[1]。吕莹等研究表明淫羊藿可不同程度提高运动员的HB、血糖水平、有利于维持高强度运动能力[2]。刘杰等报道了硒作为一种必需的微量元素，具有清除氧化自由基、增强机体免疫力的作用[3]。沈玉先等采用定量溶血素测定法及碳颗粒廓清实验发现富硒酵母对环磷酰胺引起小鼠脾指数及抗体生成的降低，对正常小鼠巨噬细胞的吞噬功能有促进作用，证实富硒酵母具有增强免疫力作用[4]。张卫明等观察灵芝孢子粉可以促进小鼠细胞免疫功能，提高体液免疫功能，促进小鼠体内抗体的产生，具增强小鼠腹腔巨噬细胞功能的作用[5]。王换换等观察灵芝孢子粉具有抗疲劳作用，探究其机制为一是可以增加机体能量供应，如糖原的储备；二是能提高乳酸脱氢酶的活力，清除机体过度的乳酸，以达到缓解疲劳的作用[6]。
疲劳作为人体正常活动的一种现象，当疲劳时身体机能会暂时下降，适当休息可恢复正常[7]，但过度疲劳工作则会导致机体免疫力降低，容易导致各种病症的发生和发展。本实验探究了复方淫羊藿硒酵母冲剂的抗疲劳及增强免疫作用，能为抗疲劳、增强免疫力的研究提供一定的研究方向。
[1]查圣华，王宁，赵庆生，等.玛咖淫羊藿复方对缓解小鼠体力疲劳的作用研究.食品科技[J].2015，（2）：264-268
[2]吕莹，牛英鹏，曲天敏.淫羊藿对运动员血糖、血乳酸、血液尿素氮等指标影响的实验研究.河南师范大学学报（自然科学版）[J].2000,28（3）：93-95
[3]刘杰,徐林,吴根福.富硒酵母的研究进展.饲料工业[J].2009.（22）：44-48
[4]沈玉先,汪思应.富硒酵母对小鼠巨噬细胞功能及抗体生成的影响.微量元素与健康研究[J].1996（3）：3-4
[5]张卫明、孙晓明，吴素玲，等.灵芝孢子粉免疫调节作用研究.中国野生植物资源[J].2001，20（1）：19-20,34
[6]王换换，申正杰，肖航，等.灵芝孢子粉对小鼠抗疲劳作用及生化机制初探.营养学报[J].2019,41（2）：173-177
[7]纵艳芳，焦贤春，尚茂林.淫羊藿苷抗大鼠运动性疲劳的实验研究.吉林体育学院学报[J].2010,26（2）：90-92
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