富马酸伏诺拉生原料药中残留溶剂的测定
刘杰，孙艳阁，孙继国，刘效军，李佳璐
（寿光富康制药有限公司，山东寿光 262700）
摘要：目的：建立了气相顶空色谱法测定富马酸伏诺拉生原料药中的残留溶剂。方法：色谱柱为以聚乙二醇为键合相的毛细管柱（DB-WAX，30 m×0.32 mm×0.5 μm）；载气：氮气；柱流速：1.0ml/min；程序升温：初始温度为40 ℃，保持2min，然后以5 ℃/min的速率升温至70 ℃，保持2min，再以30 ℃/min的速率升温至230℃保持3分钟。FID检测器温度：280 ℃；进样口温度：200 ℃；顶空瓶平衡温度：100℃；平衡时间为20min；分流比：25:1；结果：在该色谱条件下，各残留溶剂峰分离度良好且空白溶剂无干扰峰，四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙腈在10%～120%浓度范围内线性关系良好。检测限浓度依次为：0.18, 0.3, 0.6, 0.87, 0.65μg/ml；定量限浓度依次为：0.53, 0.99, 1.5, 2.89, 2.18μg/ml；各溶剂精密度和回收率良好。结论：本方法灵敏度和准确度符合要求，便于操作，适用于富马酸伏诺拉生原料药中残留溶剂的测定。
关键词：顶空气相色谱；富马酸伏诺拉生；残留溶剂；四氢呋喃；乙酸乙酯；甲醇，二氯甲烷，乙腈；
中图分类号： 文献标识码： 文章编号：
Determination
of Residual Solvents in Vonoprazan Fumarate
LIU Jie，SUN Yan-ge，SUN Ji-guo，LIU Xiao-jun，LI Jia-lu
(Shouguang Fukang Pharmaceutical Co.,Ltd,Shouguang 262700)
Abstract：Objective Headspace gas
chromatography was established to determinate the residual solvents of
vonoprazan fumarate. Methods The stationary phase of capillary column
(DB-WAX, 30 m×0.32 mm×0.5μm) was polyethylene glycol with carrier gas was nitrogen
and the column flow rate was 1.0 mL/min. The temperature was programmed at 40 ℃
maintained for 2 min, at a rate of 5 ℃/min to 70 ℃ for 2 min, and at a rate of 30℃/min
to 230℃ maintained for 3 min. FID detector temperature: 280 ℃; Inlet temperature: 200 ℃; Balance temperature of
headspace bottle: 100 °C, balance time: 20 min; Shunt
ratio: 25:1. Results Under the selected
chromatographic conditions, the blank has no
interference and the resolution of each residual solvent peak is good. Tetrahydrofuran, ethyl acetate, methanol,
dichloromethane, and acetonitrile had a good linear relationship within the
concentration range of 10% to 120%, respectively. The
LOD were 0.18, 0.3, 0.6, 0.87, 0.65 μg/mL, respectively. The LOQ were 0.53,
0.99, 1.5, 2.89, 2.18 μg/mL, respectively. All
solvents have good precision and recovery. Conclusion
The method is sensitive, accurate, and easy to operate. It is suitable for the
determination of the residual solvents of vonoprazan fumarate.
Key words:
headspace gas chromatography; vonoprazan fumarate; solvent residues; tetrahydrofuran; ethyl
acetate; methanol; dichloromethane; acetonitrile
富马酸伏诺拉生（vonoprazan fumarate）是由日本武田制药开发的一种新型口服抗胃酸药物，用于糜烂性食管炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、幽门螺杆菌的治疗[1～4]，2014年12月在日本上市，其原料药在生产过程中使用了四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙腈等有机溶剂，根据中国药典2020版第四部残留溶剂测定法的规定，四氢呋喃、甲醇、二氯甲烷、乙腈为第二类溶剂，乙酸乙酯为第三类溶剂，因此需要对这些有机溶剂的残留进行测定，参照相关文献中残留溶剂的测定方法[5～7]，本文采用顶空气相色谱法同时测定上述有机溶剂，灵敏度高、操作简便、准确可靠，可用于富马酸伏诺拉生原料药中5种残留溶剂的测定。
1 仪器与试药
7890B-7697A气相顶空色谱仪（美国Agilent公司），采用氢火焰离子化检测器（FID）；XP105DR电子分析天平（梅特勒-托利多公司）。
样品（寿光富康制药有限公司，批号A-13212109001，A-13212109002，A-13212109003）；四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙腈（分析纯，国药，500ml/瓶），N,N-二甲基乙酰胺（色谱纯，默克公司，1L/瓶）。
2
方法与结果
2.1
溶液配制
对照品贮备液：精密称量四氢呋喃72mg、乙酸乙酯500mg、甲醇300mg、二氯甲烷60mg、乙腈41mg，置同一100ml量瓶中，加入N,N-二甲基乙酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。
对照品溶液：精密量取对照品贮备液5ml，置50 ml量瓶中，加入N,N-二甲基乙酰胺定容至刻度，摇匀，精密量取此溶液5 ml，置20 ml顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。
供试品溶液：精密称量供试品约0.5 g，置20 ml顶空瓶中，加入5 ml N,N-二甲基乙酰胺，密封，作为供试品溶液。
2.2 色谱条件
试验仪器：Agilent 7890B-7697A气相顶空色谱仪；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）；色谱柱：DB-WAX毛细管柱（规格：30 m×0.32 mm×0.5 μm）；载气：氮气；柱流速：1.0 ml/min；程序升温：起始温度为40 ℃，保持2 min，以5 ℃/min的速率升温至70℃，保持2 min，再以30 ℃/min的速率升温至230 ℃，保持3 min；进样口温度200 ℃；检测器温度280 ℃；分流比：25:1；顶空瓶平衡温度100 ℃；平衡时间20 min。
2.3
方法学考察
2.3.1
专属性试验
取空白溶剂，四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙腈的对照品溶液、供试品溶液分别进样分析，试验结果见图1，空白溶剂对各残留溶剂峰和供试品溶液峰均无干扰，出峰顺序依次为四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷和乙腈，分离度都在1.5以上，符合专属性要求。
图1 专属性试验GC色谱图
2.3.2 线性试验
分别精密量取“2.1”项下对照品贮备液0.5 ml、1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml和6 ml，置于50 ml量瓶中，用N,N-二甲基乙酰胺定容至刻度，摇匀，得线性溶液1~7，精密量取各线性溶液5 ml，分别置顶空瓶中，密封。按“2.2”项下条件测定，记录色谱图，以各溶剂浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，得线性方程和相关系数，结果见表1。
表1 5种残留溶剂的线性回归方程及浓度范围、相关系数
|
溶剂 |
线性方程 |
浓度范围/（μg/ml） |
相关系数 |
|
四氢呋喃 |
y=3.3369x-0.4235 |
0.292～87.624 |
0.9999 |
|
乙酸乙酯 |
y=1.6975x-1.9399 |
0.817～612.744 |
0.9999 |
|
甲醇 |
y=0.8634x-0.2821 |
1.209～312.624 |
0.9999 |
|
二氯甲烷 |
y=0.5545x+0.0705 |
2.476～74.28 |
0.9999 |
|
乙腈 |
y=1.0462x+0.6439 |
1.664～49.908 |
0.9999 |
2.3.3
检测限及定量限
精密称取5种有机溶剂适量，用N,N-二甲基乙酰胺依次稀释，得到低浓度的对照品溶液，然后顶空进样，记录色谱图，读取主峰与空白信号的信噪比。结果：四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙腈检测限浓度分别为0.18, 0.3, 0.6, 0.87, 0.65 μg/ml；定量限浓度分别为：0.53, 0.99, 1.5, 2.89, 2.18 μg/ml。
2.3.4
精密度试验
配制6份对照品溶液，分别置于顶空瓶中，密封，顶空连续进样，记录色谱图，四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷和乙腈峰面积的RSD分别为0.86%、0.83%、0.65%、0.81%和0.48%，表明本方法具有良好精密度。
2.3.5
重复性试验
精密称取6份供试品，分别置于顶空瓶中，加入5ml对照品溶液，顶空连续进样，记录色谱图，6份供试品溶液中四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷和乙腈测定结果的RSD分别为3.34%、2.75%、3.15%、2.27%、3.22%，表明本法具有良好重复性。
2.3.6 稳定性试验
精密量取供试品5 g，置50 ml容量瓶中，加入对照品溶液使溶解，摇匀，量取5 ml，置于顶空瓶中，加盖密封，共配制5份，分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h时进样检测，记录色谱图，计算得四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷和乙腈测定结果的RSD分别为0.84%、0.93%、2.63%、0.86%和0.93%，结果表明溶液在12 h内稳定。
2.3.7 回收率试验
精密量取对照品贮备液0.5ml、5ml和6 ml，各置50 ml量瓶中，加N,N-二甲基乙酰胺定容至刻度，摇匀，得到限度10%、100%和120%的对照溶液。精密称取供试品0.5 g，共9份，分别置于20 ml顶空瓶中，加入上述3种浓度的对照溶液各5 ml，每种浓度的溶液配制3份，摇晃至溶解，密封，得10%、100%和120%的回收率溶液，顶空进样记录色谱图。同时配制对照品溶液，取5 ml置于顶空瓶中，密封，进样，记录色谱图。按外标法计算得四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷和乙腈的平均回收率分别为105.6%、103.1%、99.5%、105.0%和101.4%，RSD分别为2.57%、2.15%、2.5%、1.88%和4.22%。
2.3.8 耐用性试验
精密称取供试品适量，采用标准加样法进行试验，分别改变顶空平衡时间、分流比、柱流速、进样口温度、检测器温度，与初始色谱条件进行比较，偏差结果见表2。结果表明，本法的耐用性良好。
表2 耐用性结果
|
条件改变 |
四氢呋喃% |
乙酸乙酯% |
甲醇% |
二氯甲烷% |
乙腈% |
|
顶空平衡时间30min |
7.65 |
8.09 |
6.31 |
6.7 |
8.48 |
|
分流比23:1 |
6.48 |
7 |
5.57 |
5.06 |
7.18 |
|
分流比27:1 |
6.01 |
7.25 |
4.63 |
4.71 |
6.5 |
|
柱流速0.9ml/min |
3.17 |
4.04 |
2.47 |
1.85 |
4.39 |
|
柱流速1.1ml/min |
1.96 |
2.57 |
1.47 |
2.03 |
3.19 |
|
进样口温度190℃ |
6.84 |
7.9 |
5.93 |
5.71 |
8.48 |
|
进样口温度210℃ |
4.09 |
4.85 |
3.16 |
1.57 |
5.17 |
|
检测器温度270℃ |
4.15 |
4.7 |
4.01 |
3.95 |
5.04 |
|
检测器温度290℃ |
1.85 |
2.54 |
1.96 |
0.79 |
3.17 |
2.3.9 样品测定
分别配制对照品溶液和供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件顶空进样检测，根据色谱图的峰面积以外标法计算5种有机溶剂的含量，结果见表3。结果表明，样品中只检出甲醇，其余溶剂均未检出。
表3 样品检测结果
|
批号 |
检出溶剂种类 |
残留量% |
|
A-13212109001 |
甲醇 |
0.011 |
|
A-13212109002 |
甲醇 |
0.012 |
|
A-13212109003 |
甲醇 |
0.007 |
3
结论
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