毛发中氯胺酮及其代谢物LC-MS/MS检验方法研究
陈雅琪*
（中国刑事警察学院 安全防范技术与工程 辽宁 沈阳 110000）
摘 要：目的 建立毛发中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检验方法。方法 称取毛发样品20 mg，依次用去离子水、丙酮等洗净，晾干，置含陶珠的毛发毒品检测提取试剂管中，用含内标氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4的甲醇:水(1:1)溶液研磨提取，提取液用0.22 μm微孔有机滤膜过滤，用LC-MS/MS检测。结果 氯胺酮在0.01~50 ng/mg质量范围内线性关系良好(r2=0.9923)，检出限0.005 ng/mg，定量限0.01 ng/mg；去甲氯胺酮在0.01~50 ng/ mg质量范围内线性关系良好(r2=0.9973)，检出限0.005 ng/mg，定量限0.01 ng/mg。结论 所建立的毛发中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮LC-MS/MS检验方法操作简便、检测灵敏度较高，可用于公安实际氯胺酮吸食案件中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的检验。
中图分类号：O657.6
Study on the test method of ketamine and its metabolites LC-MS/MS in hair
Chen Yaqi
（Security Technology and Engineering,Criminal Investigation Police University of China,shenyang 110000 China）
(Criminal Investigation Police University of China,Shenyang110000 Liaoning,China)
Abstract: Objective Objective to establish a method for the determination of ketamine and its metabolite norketamine in hair by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Method Weigh 20 mg of hair sample, which wash it with deionized water and acetone, dry it in the air, and put it into the hair drug detection and extraction reagent tube containing ceramic beads, the extraction was carried out by grinding with methanol: water (1:1) solution containing internal standard ketamine-D4 and norketamine-D4, 0.22 μm microporous organic filter membrane filtration, LC-MS/MS detectio. Results Ketamine has a good linear relationship in the mass range of 0.01~50 ng/mg (r2=0.9923), check out 0.005 ng/mg, quantitative limit of 0.01 ng/mg; noreketamine has a good linear relationship in the mass range of 0.01~50 ng/mg (r2=0.9973), check out 0.005 ng/mg, quantitative limit of 0.01 ng/mg. Conclusion The test method of ketamine and its metabolites in hair LC-MS/MS is simple in operation and has high detection sensitivity, It can be used for the test of ketamine and its metabolite nucloamine in actual ketamine smoking cases.
Keywords: hair; ketamine; noreketamine; LC-MS/MS
在对传统吸毒案件进行毒品检测时，其中被我们所常常的知道的是用不同的毒品检测试剂对所提取的生物检材进行检测，但传统生物检材面临难保存、易污染等问题，同时毒品在人体体液中代谢速度非常快，因此毒品存留的时间较短，如O6-单乙酰吗啡在体液中的检测时限仅有12小时，所以办案人员通常需在嫌疑人吸毒后48-72小时内采集到有效样品，才能确保检测结果准确有效[1-3]。相较而言，毛发检材具有稳定、易保存、不易作假、检测时限长等优点，对于公安机关实际工作中的“零口供”吸毒案件办理更具针对性。
一些毒贩不断创新毒品的类型花样，对基本的毒品化学结构进行修改，使用不同的的化工原料作为修改，或直接假装成毒品进行贩卖，具有极强的迷惑性和蛊惑性，给后续的监管执法带来不小的难度[3-4]，其中血液、尿液等生物体液传统检材样本的缺点有检测时效较短，不易采集和保存等，对于长时间以外的生物检材难以识别。
氯胺酮可快速起效治疗抑郁症、双相障碍、自杀意念等，除临床治疗价值外，其常见副作用主要包括嗜睡、头晕、视力模糊、口干、烦躁、焦虑、心动过速、血压升高等。氯胺酮作为辅助麻醉剂用于ECT治疗中会导致认知功能下降或不安等。作为一种神经毒性滥用药物，当以高剂量和长时间给药时，必须关注氯胺酮的安全性和依赖性[4-6]。氯胺酮的实际临床应用研究必须时刻保持谨慎，需要不断评估和权衡抗抑郁作用的应用价值及潜在风险。鉴于对毒品问题的深恶痛绝，世界各国在打击毒品犯罪问题上，表现出越来越硬的态度，并且达成共识，应当加强政府间禁毒执法合作，共同打击毒品犯罪。
氯胺酮的使用存在着一些局限性，包括注射氯胺酮后出现谵妄、幻觉、躁动不安等分离效应，以及目前给药途径的限制，都阻碍了氯胺酮在日常生活中的常规使用[7=9]。
大部分精神类药物都属于国家管制药物，这类物质被非法滥用。当前，精神类药物滥用的现象越来越多，并已成为各国人民日益关注的问题[10-11]。新冠肺炎疫情期间全国各地都采取了严格的防控措施，部分小区的封闭管理、关闭所有的公共场所、减少人员的流动等[12]，难以开展集中的管制执法活动，因此从这个角度看来，滥用精神类药物的现象又有可能得到增加[13]。
因其具有吸收效果好、起效时间短、抑制呼吸作用效果弱且短暂等优点[14]。此外，还具有致幻作用和精神依赖性等特点，因此已被联合国毒品与犯罪问题办公室列入“新型精神活性物质”[15]。其中毒品滥用者的生活产生较大的负面影响，因为氯胺酮滥用所导致的后果有，通过不同方面的影响导致语言、记忆、视觉感官、执行能力等认知功能的损伤和衰弱[16]。
中国国内非法制造的冰毒晶体、氯胺酮以及新精神活性物质问题严重，不但流入国内市场，而且还输出到国外市场，给全球人民的生命安全带来严重的危害[17-18]。国内贩毒团伙和贩毒人员与境外贩毒人员相互勾结从边境地区将毒品贩入内地，给内地人民的生活带来极大的安全隐患。国内毒品问题呈现出毒品来源多元无化、毒品消费多样化特点。与此同时，境内外贩毒人员相互勾结，在国内的制毒活动日益向规模化发展。在禁毒工作任务艰巨、形势复杂的新时期，我国毒品问题又出现了许多新情况和新特点。
因此，在现场快速检验中，考虑到取样便捷、保护隐私等因素，一般选用头发作为检材[19]。建立简便、快速的LC-MS/MS方法同时测定头发中的氯胺酮及其代谢物，更加有利于案件的侦破，满足公安实际工作的需要。通过LC-MS/MS测得氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮、去甲氯胺酮-D4色谱峰图，以其色谱峰面积之比为Y，以氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度为X进行线性回归，得到氯胺酮、去甲氯胺酮的线性回归方程、检出限、定量限。
1 实验部分
WATERS/AB Sciex UPLC-API4000，配有电喷雾离子源（ESI）；毛发毒品检测提取仪：迪安DAFT-02；分析天平：安德特ES1035A，感量0.1 mg；离心机：湘仪TG16-WS；超声波清洗仪：洁盟JP-060ST；涡旋混合器：其林贝尔QL-861；移液器：Eppendorf可调量程移液器。
1.2 材料与试剂
甲醇、乙腈、甲酸、甲酸胺：HPLC级；丙酮：分析纯；流动相A相（0.2 %甲酸乙腈液）：分别称取0.63 g甲酸胺和2 mL甲酸溶液溶于100 mL纯净水中，置1000 mL的容量瓶，加入乙腈定量至刻度，混匀；流动相B相（10 mmol/L甲酸胺和0.2 %甲酸缓冲液）：分别称取0.63 g甲酸胺和2 mL甲酸溶液置1000mL容量瓶中。加水定量至刻度，混匀；pH值约为4；100 μg/mL氘代内标储备液：100 μg/mL 氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 氘代内标储备液，购买于北京精诚华翔科技有限公司[21]；0.22 μm尼龙滤膜；1 mg/mL标准储备液：1 mg/mL氯胺酮、去甲氯胺酮标准储备液，购买于公安部国家毒品实验室；5 ng/mL混合氘代内标工作液：移取5 μg/mL混合氘代内标工作液0.1 mL，用甲醇定容至100 mL，混匀，密封，置冰箱冷冻保存；实验中所用其他浓度工作液由上述浓度用甲醇稀释，置冰箱中冷冻保存。
1.3 仪器分析条件
仪器型号：液相色谱质谱联用仪WATERS/AB Sciex UPLC-API4000，配有电喷雾离子源（ESI）；液相柱：Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm × 50 mm, 1.7 μm）；柱温：40 ℃；流速：0.35 mL/min；进样量：2 μL；流动相：0.2 %甲酸乙腈溶液为A相，0.2 %甲酸水溶液为B，其中梯度洗脱程序见下表1：
表1 梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution procedure
时间（min）
A%
B%
0.00
12.00
88.00
1.00
12.00
88.00
5.00
88.00
12.00
8.00
88.00
12.00
8.10
12.00
88.00
10.00
12.00
88.00
1.3.2 质谱条件
电喷雾离子源，正离子模式（ESI+）；离子源温度：550 ℃；离子源电压：5500 V；检测方式：多反应监测（MRM）；每个化合物分别选择两对母离子/子离子对作为定性离子对，其定性离子对、去簇电压（DP）、碰撞能量（CE）和保留时间见表2。
表2 检测目标物定性离子对、DP和碰撞能量（CE）以及保留时间
Table 2 The qualitative ion pair, DP, collision energy (CE) and retention time of the target are detected
名称
离子对
DP（volts）
CE（volts）
保留时间(min)
氯胺酮
238.1/125.01）
30
16
4.09
242.1/129.0
27
去甲氯胺酮
224.1/125.01）
40
13
3.78
228.1/129.0
23
氯胺酮-D4
242.1/129.01）
242.1/211.1
40
39
21
3.96
去甲氯胺酮-D4
224.1/125.01）
242.1/211.1
40
13
21
3.82
1.4 检材处理
称取毛发样品20 mg，依次用去离子水和丙酮洗涤两次，晾干，置于含陶珠的提取管中，加入含内标氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 mg/mL的甲醇：水（1:1）溶液1 mL，将提取管置于毛发毒品检测提取仪中研磨提取[22]；提取液5000 rpm转速下离心5 min，取上层清液，提取液用0.20 μm尼龙滤膜过滤，滤液加入1.5 mL样品瓶中，根据纸质物证袋上的编号为样品处理液填写上编号。
称取空白毛发样品20 mg，操作过程如上，根据纸质物证袋上的编号为样品处理液填写上编号。
分别将甲醇、空白对照样品、检出限样品、空白添加样品置LC- MS/MS仪自动进样器的样品架上。编辑LC-MS/MS分析方法及进样序列，待仪器状态就绪后，运行序列，进样检测。分析实验中各样品中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的可疑色谱峰，并记录可疑色谱峰保留时间以及离子对的相对丰度比。
在该实验条件下，氯胺酮、去甲氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 都得到分离，保留时间分别为1.15 min、1.17 min、2.72 min、2.87 min，毛发检材中的内源性杂质所对应检测到的目标物无其他因素干扰。（氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮、去甲氯胺酮-D4 色谱图如下图1、图2、图3、图4）
图1 氯胺酮色谱图
Fig.1 Ketamine chromatogram
图2 氯胺酮-D4色谱图
Fig.2 Ketamine-D4 chromatogram
图3 去甲氯胺酮色谱图
Fig.3 Chromatogram of norketamine
图4 去甲氯胺酮-D4色谱图
Fig.4 Chromatogram of norketamine-D4
2.2 回归方程与线性范围
准确称取毛发样品20 mg，依次用适量去离子水、丙酮振荡洗涤两次，晾干，置含陶珠的提取管中；加入含内标氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 5 ng/mL的甲醇:水（1:1）溶液1 mL，加入氯胺酮、去加氯胺酮分别配置成0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mg氯胺酮、去加氯胺酮的待检样品。按照“2.2”方法处理，LC-MS/MS法检测，以氯胺酮、去甲氯胺酮和氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4的色谱峰面积之比为Y，以氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度（ng/mg）为X进行线性回归。结果表明氯胺酮、去甲氯胺酮均在0.01-50.0 ng/mg范围内线性关系良好[23]。
得到检测目标物的回归方程为：氯胺酮的回归方程为：Y= 2.4973X + 1.2365，r2 = 0.9923，线性范围：0.01～50 ng/mg。去甲氯胺酮的回归方程为：Y= 2.8767X +0.2595，r2 = 0.9973，线性范围：0.01～50 ng/mg
2.3 检出限、定量限
检出限：当检测目标色谱峰高接近并且相当于基线噪音的3倍浓度时即可确定为检出限。测所得毛发中氯胺酮及其代谢物的检出限分别为：氯胺酮的检出限为0.0035 ng/mg、去甲氯胺酮的检出限为0.0035 ng/mg。
定量限：检测所得毛发中氯胺酮及其代谢物的定量限分别为：氯胺酮的定量限为0.01 ng/mg、去甲氯胺酮的定量限为0.01 ng/mg。
3 方法应用
用本文建立的毛发中氯胺酮及其代谢物LC-MS/MS检验方法对在公安实际中所收集到的9例吸食K粉人员的毛发样本(编号：MFYB1-MFYB9)进行了检测。样品处理后，将待测毛发样品置LC-MS/MS仪自动进样器的样品架上。编辑LC-MS/MS分析方法及进样序列，待仪器状态就序后，运行序列，进样检测。记录下峰面积，通过计算出氯胺酮、去甲氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4色谱峰面积之比，用本文研究所建立的方法，代入公式计算得出毒品含量，结果可靠。
4 结论
本文研究且建立的该方法操作简便、检测灵敏度较高，可用于毛发中氯胺酮、去甲氯胺酮的测定，该方法简单、易于操作、回收率较高、重现性较好，但在实验过程中还存在检材获取量大等问题，精度还可以进一步加强，本文研究所建立的方法为以后的公安工作其中的毒品检验、检验氯胺酮及其代谢物有了一个更好的检测方法。
参考文献：
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摘 要：目的 建立毛发中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检验方法。方法 称取毛发样品20 mg，依次用去离子水、丙酮等洗净，晾干，置含陶珠的毛发毒品检测提取试剂管中，用含内标氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4的甲醇:水(1:1)溶液研磨提取，提取液用0.22 μm微孔有机滤膜过滤，用LC-MS/MS检测。结果 氯胺酮在0.01~50 ng/mg质量范围内线性关系良好(r2=0.9923)，检出限0.005 ng/mg，定量限0.01 ng/mg；去甲氯胺酮在0.01~50 ng/ mg质量范围内线性关系良好(r2=0.9973)，检出限0.005 ng/mg，定量限0.01 ng/mg。结论 所建立的毛发中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮LC-MS/MS检验方法操作简便、检测灵敏度较高，可用于公安实际氯胺酮吸食案件中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的检验。
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Study on the test method of ketamine and its metabolites LC-MS/MS in hair
Chen Yaqi
（Security Technology and Engineering,Criminal Investigation Police University of China,shenyang 110000 China）
(Criminal Investigation Police University of China,Shenyang110000 Liaoning,China)
Abstract: Objective Objective to establish a method for the determination of ketamine and its metabolite norketamine in hair by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Method Weigh 20 mg of hair sample, which wash it with deionized water and acetone, dry it in the air, and put it into the hair drug detection and extraction reagent tube containing ceramic beads, the extraction was carried out by grinding with methanol: water (1:1) solution containing internal standard ketamine-D4 and norketamine-D4, 0.22 μm microporous organic filter membrane filtration, LC-MS/MS detectio. Results Ketamine has a good linear relationship in the mass range of 0.01~50 ng/mg (r2=0.9923), check out 0.005 ng/mg, quantitative limit of 0.01 ng/mg; noreketamine has a good linear relationship in the mass range of 0.01~50 ng/mg (r2=0.9973), check out 0.005 ng/mg, quantitative limit of 0.01 ng/mg. Conclusion The test method of ketamine and its metabolites in hair LC-MS/MS is simple in operation and has high detection sensitivity, It can be used for the test of ketamine and its metabolite nucloamine in actual ketamine smoking cases.
Keywords: hair; ketamine; noreketamine; LC-MS/MS
在对传统吸毒案件进行毒品检测时，其中被我们所常常的知道的是用不同的毒品检测试剂对所提取的生物检材进行检测，但传统生物检材面临难保存、易污染等问题，同时毒品在人体体液中代谢速度非常快，因此毒品存留的时间较短，如O6-单乙酰吗啡在体液中的检测时限仅有12小时，所以办案人员通常需在嫌疑人吸毒后48-72小时内采集到有效样品，才能确保检测结果准确有效[1-3]。相较而言，毛发检材具有稳定、易保存、不易作假、检测时限长等优点，对于公安机关实际工作中的“零口供”吸毒案件办理更具针对性。
一些毒贩不断创新毒品的类型花样，对基本的毒品化学结构进行修改，使用不同的的化工原料作为修改，或直接假装成毒品进行贩卖，具有极强的迷惑性和蛊惑性，给后续的监管执法带来不小的难度[3-4]，其中血液、尿液等生物体液传统检材样本的缺点有检测时效较短，不易采集和保存等，对于长时间以外的生物检材难以识别。
氯胺酮可快速起效治疗抑郁症、双相障碍、自杀意念等，除临床治疗价值外，其常见副作用主要包括嗜睡、头晕、视力模糊、口干、烦躁、焦虑、心动过速、血压升高等。氯胺酮作为辅助麻醉剂用于ECT治疗中会导致认知功能下降或不安等。作为一种神经毒性滥用药物，当以高剂量和长时间给药时，必须关注氯胺酮的安全性和依赖性[4-6]。氯胺酮的实际临床应用研究必须时刻保持谨慎，需要不断评估和权衡抗抑郁作用的应用价值及潜在风险。鉴于对毒品问题的深恶痛绝，世界各国在打击毒品犯罪问题上，表现出越来越硬的态度，并且达成共识，应当加强政府间禁毒执法合作，共同打击毒品犯罪。
氯胺酮的使用存在着一些局限性，包括注射氯胺酮后出现谵妄、幻觉、躁动不安等分离效应，以及目前给药途径的限制，都阻碍了氯胺酮在日常生活中的常规使用[7=9]。
大部分精神类药物都属于国家管制药物，这类物质被非法滥用。当前，精神类药物滥用的现象越来越多，并已成为各国人民日益关注的问题[10-11]。新冠肺炎疫情期间全国各地都采取了严格的防控措施，部分小区的封闭管理、关闭所有的公共场所、减少人员的流动等[12]，难以开展集中的管制执法活动，因此从这个角度看来，滥用精神类药物的现象又有可能得到增加[13]。
因其具有吸收效果好、起效时间短、抑制呼吸作用效果弱且短暂等优点[14]。此外，还具有致幻作用和精神依赖性等特点，因此已被联合国毒品与犯罪问题办公室列入“新型精神活性物质”[15]。其中毒品滥用者的生活产生较大的负面影响，因为氯胺酮滥用所导致的后果有，通过不同方面的影响导致语言、记忆、视觉感官、执行能力等认知功能的损伤和衰弱[16]。
中国国内非法制造的冰毒晶体、氯胺酮以及新精神活性物质问题严重，不但流入国内市场，而且还输出到国外市场，给全球人民的生命安全带来严重的危害[17-18]。国内贩毒团伙和贩毒人员与境外贩毒人员相互勾结从边境地区将毒品贩入内地，给内地人民的生活带来极大的安全隐患。国内毒品问题呈现出毒品来源多元无化、毒品消费多样化特点。与此同时，境内外贩毒人员相互勾结，在国内的制毒活动日益向规模化发展。在禁毒工作任务艰巨、形势复杂的新时期，我国毒品问题又出现了许多新情况和新特点。
因此，在现场快速检验中，考虑到取样便捷、保护隐私等因素，一般选用头发作为检材[19]。建立简便、快速的LC-MS/MS方法同时测定头发中的氯胺酮及其代谢物，更加有利于案件的侦破，满足公安实际工作的需要。通过LC-MS/MS测得氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮、去甲氯胺酮-D4色谱峰图，以其色谱峰面积之比为Y，以氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度为X进行线性回归，得到氯胺酮、去甲氯胺酮的线性回归方程、检出限、定量限。
1 实验部分
WATERS/AB Sciex UPLC-API4000，配有电喷雾离子源（ESI）；毛发毒品检测提取仪：迪安DAFT-02；分析天平：安德特ES1035A，感量0.1 mg；离心机：湘仪TG16-WS；超声波清洗仪：洁盟JP-060ST；涡旋混合器：其林贝尔QL-861；移液器：Eppendorf可调量程移液器。
1.2 材料与试剂
甲醇、乙腈、甲酸、甲酸胺：HPLC级；丙酮：分析纯；流动相A相（0.2 %甲酸乙腈液）：分别称取0.63 g甲酸胺和2 mL甲酸溶液溶于100 mL纯净水中，置1000 mL的容量瓶，加入乙腈定量至刻度，混匀；流动相B相（10 mmol/L甲酸胺和0.2 %甲酸缓冲液）：分别称取0.63 g甲酸胺和2 mL甲酸溶液置1000mL容量瓶中。加水定量至刻度，混匀；pH值约为4；100 μg/mL氘代内标储备液：100 μg/mL 氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 氘代内标储备液，购买于北京精诚华翔科技有限公司[21]；0.22 μm尼龙滤膜；1 mg/mL标准储备液：1 mg/mL氯胺酮、去甲氯胺酮标准储备液，购买于公安部国家毒品实验室；5 ng/mL混合氘代内标工作液：移取5 μg/mL混合氘代内标工作液0.1 mL，用甲醇定容至100 mL，混匀，密封，置冰箱冷冻保存；实验中所用其他浓度工作液由上述浓度用甲醇稀释，置冰箱中冷冻保存。
1.3 仪器分析条件
仪器型号：液相色谱质谱联用仪WATERS/AB Sciex UPLC-API4000，配有电喷雾离子源（ESI）；液相柱：Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm × 50 mm, 1.7 μm）；柱温：40 ℃；流速：0.35 mL/min；进样量：2 μL；流动相：0.2 %甲酸乙腈溶液为A相，0.2 %甲酸水溶液为B，其中梯度洗脱程序见下表1：
表1 梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution procedure
时间（min） | A% | B% |
0.00 | 12.00 | 88.00 |
1.00 | 12.00 | 88.00 |
5.00 | 88.00 | 12.00 |
8.00 | 88.00 | 12.00 |
8.10 | 12.00 | 88.00 |
10.00 | 12.00 | 88.00 |
1.3.2 质谱条件
电喷雾离子源，正离子模式（ESI+）；离子源温度：550 ℃；离子源电压：5500 V；检测方式：多反应监测（MRM）；每个化合物分别选择两对母离子/子离子对作为定性离子对，其定性离子对、去簇电压（DP）、碰撞能量（CE）和保留时间见表2。
表2 检测目标物定性离子对、DP和碰撞能量（CE）以及保留时间
Table 2 The qualitative ion pair, DP, collision energy (CE) and retention time of the target are detected
名称 | 离子对 | DP（volts） | CE（volts） | 保留时间(min) | ||||
氯胺酮 | 238.1/125.01） | 30 | 16 | 4.09 | ||||
242.1/129.0 | 27 | |||||||
去甲氯胺酮 | 224.1/125.01） | 40 | 13 | 3.78 | ||||
228.1/129.0 | 23 | |||||||
氯胺酮-D4 |
| 40 |
| 3.96 | ||||
去甲氯胺酮-D4 |
| 40 |
| 3.82 |
1.4 检材处理
称取毛发样品20 mg，依次用去离子水和丙酮洗涤两次，晾干，置于含陶珠的提取管中，加入含内标氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 mg/mL的甲醇：水（1:1）溶液1 mL，将提取管置于毛发毒品检测提取仪中研磨提取[22]；提取液5000 rpm转速下离心5 min，取上层清液，提取液用0.20 μm尼龙滤膜过滤，滤液加入1.5 mL样品瓶中，根据纸质物证袋上的编号为样品处理液填写上编号。
称取空白毛发样品20 mg，操作过程如上，根据纸质物证袋上的编号为样品处理液填写上编号。
分别将甲醇、空白对照样品、检出限样品、空白添加样品置LC- MS/MS仪自动进样器的样品架上。编辑LC-MS/MS分析方法及进样序列，待仪器状态就绪后，运行序列，进样检测。分析实验中各样品中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的可疑色谱峰，并记录可疑色谱峰保留时间以及离子对的相对丰度比。
在该实验条件下，氯胺酮、去甲氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 都得到分离，保留时间分别为1.15 min、1.17 min、2.72 min、2.87 min，毛发检材中的内源性杂质所对应检测到的目标物无其他因素干扰。（氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮、去甲氯胺酮-D4 色谱图如下图1、图2、图3、图4）
图1 氯胺酮色谱图
Fig.1 Ketamine chromatogram
图2 氯胺酮-D4色谱图
Fig.2 Ketamine-D4 chromatogram
图3 去甲氯胺酮色谱图
Fig.3 Chromatogram of norketamine
图4 去甲氯胺酮-D4色谱图
Fig.4 Chromatogram of norketamine-D4
2.2 回归方程与线性范围
准确称取毛发样品20 mg，依次用适量去离子水、丙酮振荡洗涤两次，晾干，置含陶珠的提取管中；加入含内标氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4 5 ng/mL的甲醇:水（1:1）溶液1 mL，加入氯胺酮、去加氯胺酮分别配置成0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mg氯胺酮、去加氯胺酮的待检样品。按照“2.2”方法处理，LC-MS/MS法检测，以氯胺酮、去甲氯胺酮和氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4的色谱峰面积之比为Y，以氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度（ng/mg）为X进行线性回归。结果表明氯胺酮、去甲氯胺酮均在0.01-50.0 ng/mg范围内线性关系良好[23]。
得到检测目标物的回归方程为：氯胺酮的回归方程为：Y= 2.4973X + 1.2365，r2 = 0.9923，线性范围：0.01～50 ng/mg。去甲氯胺酮的回归方程为：Y= 2.8767X +0.2595，r2 = 0.9973，线性范围：0.01～50 ng/mg
2.3 检出限、定量限
检出限：当检测目标色谱峰高接近并且相当于基线噪音的3倍浓度时即可确定为检出限。测所得毛发中氯胺酮及其代谢物的检出限分别为：氯胺酮的检出限为0.0035 ng/mg、去甲氯胺酮的检出限为0.0035 ng/mg。
定量限：检测所得毛发中氯胺酮及其代谢物的定量限分别为：氯胺酮的定量限为0.01 ng/mg、去甲氯胺酮的定量限为0.01 ng/mg。
3 方法应用
用本文建立的毛发中氯胺酮及其代谢物LC-MS/MS检验方法对在公安实际中所收集到的9例吸食K粉人员的毛发样本(编号：MFYB1-MFYB9)进行了检测。样品处理后，将待测毛发样品置LC-MS/MS仪自动进样器的样品架上。编辑LC-MS/MS分析方法及进样序列，待仪器状态就序后，运行序列，进样检测。记录下峰面积，通过计算出氯胺酮、去甲氯胺酮、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4色谱峰面积之比，用本文研究所建立的方法，代入公式计算得出毒品含量，结果可靠。
4 结论
本文研究且建立的该方法操作简便、检测灵敏度较高，可用于毛发中氯胺酮、去甲氯胺酮的测定，该方法简单、易于操作、回收率较高、重现性较好，但在实验过程中还存在检材获取量大等问题，精度还可以进一步加强，本文研究所建立的方法为以后的公安工作其中的毒品检验、检验氯胺酮及其代谢物有了一个更好的检测方法。
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