人鼻病毒3C蛋白酶发酵工艺研究

　　

作为一种通过切割方式去除融合蛋白标签的工具酶，人鼻病毒3C 蛋白酶除应用于学术研究外，也广泛应用于工业化，如在mRNA 的体外转录合成中，需要用到3C 蛋白酶去除若干合成酶因为各种目的所携带的标签。随着当前mRNA相关管线的扩增，对该酶的需求也将逐渐增加，从产业化角度考虑，极有必要对重组大肠杆菌发酵产3C蛋白酶进行工艺研究，为其放大至生产提供依据，具体的研究方法及结果如下：借助响应面分析方法优化了表达3C 蛋白酶的大肠杆菌发酵培养基，确定培养基中对菌体生产具有显著影响的因素及最优浓度，即酵母粉4.94 g L^-1.，蛋白胨8.60 g L^-1.，甘油9.54 g L^-1.，随后进行7 L发酵罐的放大发酵研究，确定了pH值 6.90 ～7.10，DO值 15% ～ 30%，培养温度37 ℃，诱导温度22 ℃的发酵条件，并考察了甜菜碱、山梨醇对菌体表达3C 蛋白酶的影响。

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