HPLC法测定强力天麻杜仲丸中阿魏酸的含量

　　

HPLC法测定强力天麻杜仲丸中阿魏酸的含量

李媛媛

江苏省镇江市药品检验所 镇江 212003

摘 要 目的：建立高效液相色谱法测定强力天麻杜仲丸中阿魏酸的含量。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相为乙腈-0.085%磷酸溶液（17:83），流速为1.0 mL·min^-1，检测波长为316 nm，柱温为30℃。结果：阿魏酸在0.01064 μg～0.2128 μg (r=0.9999,n=9)之间与峰面积线性关系良好，平均回收率为99.75%, RSD为1.46%。结论：本方法简便、准确、稳定性好，灵敏度高，可作为强力天麻杜仲丸的质量控制方法。

关键词 强力天麻杜仲丸；阿魏酸；高效液相色谱；含量测定

Determination of ferulic acid in Qianglitianmaduzhong pills by HPLC

LI Yuan-yuan

Jiangsu Province Zhenjiang Institute for Drug Control, Zhenjiang, 212003, China

ABSTRACT Objective: To establish a method for determination of ferulic acid in Qianglitianmaduzhong pills by HPLC. Methods: The determination was carried out with Symmetry C-18 column. The mobile phase was acetonitrile-0.085%phoshoricacid solution（17:83）.The flow rate was at 1.0 mL·min^-1. The detective wavelength was at 316 nm and the column temperature was 30℃. Results: The content of ferulic acid was well linearly related to its peak area in range of 0.01064 μg～0.2128 μg (r=0.9999,n=9). Average recovery rate of the method was 99.75% and RSD was 1.46%. Conclusion: The methods was simple and accurate with good reproducibility and can be used to control the quality of Qianglitianmaduzhong pills.

KEY WORDS Qianglitianmaduzhong pills; Ferulic acid; HPLC; Content assay

强力天麻杜仲丸是由天麻、盐杜仲、当归、地黄、独活、制草乌、附子（制）、囊本、玄参、川牛膝、槲寄生、羌活共12味中药经粉碎、蜜炼制成。具有散风活血、舒筋止痛的功效，临床主要用于中风引起的肢体麻木，腰腿酸痛，行走不便，头痛头昏等。其中主要成分当归[Angellica sinensis (Oliv.)Diels]药性甘、辛、温，归肝，心、脾经^[1]。具有补血活血，调经止痛的功效，临床使用中素有“十方九归”的说法，在老年性疾病、心血管疾病等方面疗效独特，当归在本方中发挥重要作用^[2]。阿魏酸为当归已知的有效成分之一，具有促进细胞免疫和体液免疫的功能^[3]。现行标准仅有对天麻中天麻素的含量进行测定，未见当归质量控制方面的报道。为有效控制产品质量，笔者参考有关文献^[4-6]，用高效液相色谱法测定阿魏酸的含量，为强力天麻杜仲丸的质量控制提供有效的方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

安捷伦1260液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司），BP211D十万分之一电子天平（德国赛多利斯仪器公司），HH恒温电热恒温水浴锅（金坛市中大仪器厂）,KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂

乙腈（色谱纯），甲醇（分析纯），磷酸（分析纯），水为纯化水。阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773-201012），强力天麻杜仲丸（太极集团重庆桐君阁药厂有限公司，批号：14020003、14080024、12070011）。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱：伊利特C₁₈（4.6mm×200mm，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸溶液（17:83）；流速：1.0 mL·min^-1；检测波长：316 nm；柱温：30℃；进样量：20 μL。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000，分离度大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备：精密称取阿魏酸对照品10.68 mg，置于100 mL容量瓶中，用70%甲醇定容，即得阿魏酸储备液（106.4 μg·mL^-1）；精密吸取对照品储备液5 mL至50 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（10.64 μg·mL^-1）。

2.2.2 供试品溶液的制备：取本品，研细，取5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备：按处方比例配成不含当归的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

照上述色谱条件，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，进行测定。供试品与对照品在相同的保留时间有相同的色谱峰，而阴性对照溶液没有，结果表明阴性对照溶液无干扰。结果见图1。

A

B

C

图1 阿魏酸高效液相色谱图

Fig.1 HPLC chromatogram of ferulic acid

A 阿魏酸对照品溶液 B供试品溶液 C阴性对照

A Ferulic acid reference substance B Test sample C Negative control

2.4 线性关系

精密吸取阿魏酸对照品溶液（10.64 μg·mL^-1），1、2、5、10、15、20 μL注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标Y，进样量为横坐标X，绘制阿魏酸的标准曲线并计算回归方程。得回归方程：Y=5155X+1.724, r=0.9999,结果表明，在进样范围0.01064 μg～0.2128 μg内，线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取阿魏酸对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积，计算RSD值。阿魏酸峰面积RSD为0.21%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液（14020003），分别放置0、1、2、3、4、5、6 h重复进样20 μL, 测定峰面积，计算RSD值。阿魏酸峰面积RSD为0.7%，表明供试品溶液在室温6 h内性质稳定。

2.7 重复性试验

取6份同一批号样品（14020003），按2.2.2项下供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，分别计算阿魏酸的含量及RSD值。阿魏酸含量平均为15.93 μg·g^-1，RSD为0.52%，方法的重复性良好。

2.8 加样回收试验

取9份已知含量的样品（14020003，含量15.93 μg·g^-1），分成三个剂量组，每组按低、中、高（1 mL、1.5 mL、2 mL）分别加入阿魏酸对照品储备液，按2.2.2项下供试品溶液的制备方法制备。吸取上述供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定峰面积，计算加样回收率及RSD。阿魏酸平均回收率为99.75%，RSD为1.46%，表明回收率良好。结果见表1。

表1加样回收率测定结果

Tab.1 Results of recovery test sample (n=9)

称样量 （g）	样品中含量 （μg）	对照品加入量 （μg）	测得总量（μg）	回收率 （%）	平均回收率（%）	RDD （%）
5.0102	15.99	10.64	26.53	99.06
5.0245	16.33	10.64	26.85	98.87
5.0198	15.92	10.64	26.57	100.09
4.9883	15.77	15.96	31.49	98.50
5.0167	15.90	15.96	31.74	99.25	99.75	1.46
4.9962	15.68	15.96	32.04	102.51
5.0215	16.47	21.28	38.14	101.83
5.0144	16.05	21.28	37.02	98.54
5.0173	16.06	21.28	37.14	99.06

2.9 含量测定

取3个不同批号的强力天麻杜仲丸，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，吸取上述供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定峰面积，计算含量（μg·g^-1）。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

Tab.2 The determination result of sample

批号	含量（μg·g-1）
14020003	15.883
14080024	16.345
12070011	16.144

3 讨论

3.1 实验过程中比较了不同提取溶剂（甲醇、70%甲醇、水），分别采用回流和超声的提取方法，在不同时间（30、45、60 min）的提取效果，结果表明本文的提取方法充分、完全、干扰少。

3.2 实验过程中也尝试了以下的流动相，以甲醇-1％冰醋酸溶液（25:75），甲醇-0.085%的磷酸溶液（17:83），乙腈-0.085%磷酸溶液（12:88）作为流动相，调整各组分的比例，发现以乙腈-0.085%磷酸溶液（17:83）作流动相，峰形好，柱效好，分离度高。

3.3 阿魏酸不稳定，易受热发生异构化而分解，所以在实验过程中要使用棕色量瓶、避光保存。

3.4 通过实验，确定了强力天麻杜仲丸中阿魏酸的含量测定，结果可靠，方法准确，可用于强力天麻杜仲丸的质量控制。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中国药典一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010:124~125.

[2] 马瑞君，王钦，陈学林.当归的研究进展[J].中草药，2002，33（03）:280~282.

[3] 袁丽霞，王红. HPLC法测定当归苦参丸中阿魏酸的含量[J].中国药事，2008,22（1）：61~63.

[4] 唐立英，王祝举，赫炎，等.高效液相色谱法测定当归中阿魏酸的含量[J].中国实验方剂学杂质，2006,12（2）：14~15.

[5] 谢京晶，于玥，王一涛，等.HPLC法同时测定当归中6种成分的含量[J].药物分析杂质，2007,27（9）：1314~1315.

[6] 任占军，谷学新，侯士果.微波萃取法提取当归中阿魏酸的研究[J].药物分析杂质，2008,28（1）：115~117.

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